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Preguntas técnicas frecuentes (FAQ)

Preguntas técnicas comunes, respondidas por nuestro equipo de soporte técnico experto

A. ¿Puedo recibir una muestra gratis de un producto?

No ofrecemos muestras gratuitas o de prueba para fines de prueba. Nuestra política es que si un anticuerpo no funciona como se especifica en la hoja de datos, ofreceremos un reemplazo o reembolso. Si el anticuerpo se está utilizando en una especie o aplicación no probada, no podemos ofrecer un reemplazo o reembolso.

B. ¿Cómo debo elegir un anticuerpo secundario adecuado?
Los anticuerpos secundarios deben generarse contra la especie huésped como el anticuerpo primario que está utilizando. Por ejemplo, si su primario es un mouse monoclonal, necesitará un secundario anti-mouse.

C. ¿Cómo debo elegir un control de isotipo?
Los controles de isotipo se usan para confirmar que la unión del anticuerpo primario es específica y no un resultado de la unión no específica del receptor Fc u otras interacciones de proteínas. El anticuerpo de control de isotipo debe coincidir con la especie huésped principal del anticuerpo, el isotipo y la conjugación. Por ejemplo, si el anticuerpo primario es un IgG1 de ratón conjugado con FITC, entonces deberá elegir un control de isotipo IgG1 de ratón conjugado con FITC.

D. ¿Cómo debo elegir un control positivo?
Puede hacer una búsqueda bibliográfica rápida en PubMed para ver qué tejidos y células expresan la proteína de interés.

E. ¿Cómo debo hacer una alícuota de mi anticuerpo?
El tamaño de las partes alícuotas dependerá de cuánto se use típicamente en un experimento. Las alícuotas no deben ser menores de 10; cuanto más pequeña es la alícuota, más se ve afectada la concentración del stock por evaporación y adsorción del anticuerpo sobre la superficie del vial de almacenamiento.

F. ¿Cómo puedo determinar si un anticuerpo puede detectar en una especie no probada?
CUSABIO no puede garantizar que un anticuerpo funcione en una especie no probada, incluso si la alineación de la secuencia es alta. Hay muchas variables involucradas en la determinación de si un anticuerpo se unirá en otra especie.
Si no hay alternativas disponibles, y es necesario que considere comprar un anticuerpo para usar en una especie que no ha sido probada, le recomendamos verificar la alineación de secuencia del inmunógeno con la proteína que le interesa.

G. ¿Reaccionará este anticuerpo de forma cruzada con otra isoforma de esta proteína, o proteína de la misma “familia”?
Recomendamos verificar la alineación de la secuencia del inmunógeno con las isoformas u otras proteínas que le interesen. Hay varios sitios web que proporcionan una herramienta para calcular el porcentaje de alineación.
Tome una copia de la secuencia inmunógena del anticuerpo y alinee con la secuencia de la proteína de la especie que desea analizar. Recomendamos una puntuación de alineación de más del 85% como una buena indicación de que un anticuerpo puede reaccionar de forma cruzada. Por lo tanto, recomendamos que el porcentaje de alineación sea mucho más bajo que esto para indicar que no debe haber reactividad cruzada.

H. ¿Por qué el tamaño real de la banda western blot es diferente del previsto?
La transferencia Western es una técnica que separa las proteínas según el tamaño. En general, cuanto más pequeña es la proteína, más rápido migra a través del gel. Sin embargo, la migración también se ve afectada por otros factores, por lo que el tamaño de banda real observado puede diferir del previsto. Los factores comunes incluyen:
Modificación postraduccional , por ejemplo, fosforilación, glicosilación, etc., que aumenta el tamaño de la proteína
Escisión posterior a la traducción , por ejemplo, muchas proteínas se sintetizan como proproteínas y luego se cortan para dar la forma activa, por ejemplo, empalmes
procaspasas. variantes : el empalme alternativo puede crear proteínas de diferentes tamaños producidas a partir del mismo gen
Carga relativa – la composición de multímeros de aminoácidos (cargados frente a no cargados) , por ejemplo, dimerización de una proteína. Esto generalmente se evita en condiciones reductoras, aunque las interacciones fuertes pueden provocar la aparición de bandas más altas